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Spherisorb色譜柱的清洗、再生和存放

更新時(shí)間:2024-09-05      點(diǎn)擊次數(shù):1293

Spherisorb色譜柱的清洗、再生和存放

A. 清洗與再生

  如果發(fā)生峰形改變、峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時(shí)間改變、分離度變化或柱壓升高,說(shuō)明色譜柱可能已被污染。更換當(dāng)前使用的保護(hù)柱通??梢曰謴?fù)色譜柱的性能。如果色譜柱性能未恢復(fù)(或者您沒(méi)有使用保護(hù)柱),請(qǐng)遵循下文詳述的程序操作。為防止?jié)撛诘奈廴居绊憴z測(cè)器性能,建議清洗期間斷開(kāi)所有檢測(cè)器與色譜柱洗脫液的連接。對(duì)任何清洗程序來(lái)說(shuō),反轉(zhuǎn)通過(guò)色譜柱的液流方向(反沖)都可能提升清洗效率。

1、反相色譜柱

  通常情況下,用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗(小心避免緩沖液出現(xiàn)沉淀)就足以去除大部分污染物。如果沖洗不能解決問(wèn)題,可采用以下清洗和再生步驟沖洗色譜柱。請(qǐng)根據(jù)樣品和/或您認(rèn)為污染色譜柱的物質(zhì)的性質(zhì),選擇與之匹配的常規(guī)清洗方法(見(jiàn)表4)。用20倍柱體積(例如對(duì)于4.6 x 250 mm色譜柱,使用80 mL溶劑)HPLC級(jí)溶劑沖洗色譜柱。將流動(dòng)相溫度升至35-55℃可以提高清洗效率。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差,請(qǐng)致電當(dāng)?shù)氐奈痔厥擂k事處獲得更多支持。

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2、正相色譜柱

  要再生色譜柱,請(qǐng)泵送20-30倍柱體積的二氯甲烷和異丙醇通過(guò)色譜柱。也可以基于疑似污染物選用其他清洗溶劑,例如四氫呋喃(THF)。

  保護(hù)柱需要根據(jù)樣品污染情況定期更換。當(dāng)系統(tǒng)背壓穩(wěn)步上升至設(shè)定壓力限值時(shí),通常表明需要更換保護(hù)柱。突然出現(xiàn)分叉峰也表明需要更換保護(hù)柱。

 

B.存放

  將色譜柱完全密封,防止柱床因溶劑蒸發(fā)而變干。

1.反相色譜柱

  如果色譜柱需要在室溫下存放超過(guò)四天,應(yīng)使用100%乙腈在室溫下保存色譜柱(氰基的色譜柱除外)。對(duì)于高溫應(yīng)用,請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓词褂?/span>100%乙腈保存色譜柱,以便盡可能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。

  切勿使用緩沖鹽洗脫液保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽,存放前先用10倍柱體積(常規(guī)色譜柱體積請(qǐng)參閱表2)HPLC級(jí)水/有機(jī)溶劑沖洗色譜柱,然后用100%乙腈替換柱內(nèi)的水。如果不執(zhí)行這個(gè)中間步驟,在引入100%乙腈時(shí),色譜柱內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽沉淀。

  注:上述儲(chǔ)存建議的例外是用于反相方法的氰基色譜柱,這些色譜柱不應(yīng)儲(chǔ)存在100%中等極性溶劑中(乙腈、甲醇、異丙醇)。將CN-RP色譜柱儲(chǔ)存在0.1M乙酸銨/乙腈中 50/50。

 

2.正相色譜柱

  為了能在啟動(dòng)時(shí)快速平衡色譜柱,請(qǐng)使用常用流動(dòng)相保存正相色譜柱。完全密封色譜柱避免柱床蒸發(fā)和干燥。

 


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